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Chapitre III : Clonage, expression et caractérisation du CYP73A32 séquences du CYP73A37 et du CYP73A36 doivent être considérée avec méfiance car elles présentent 100% d'homologies l'exception des 25 résidus N-terminaux. En ne tenant pas compte de la séquences de Citrus paradisi, le Persil et la Rue sont les seules plantes furocoumarines pour lesquelles les séquences de C4H soient disponibles. Une hypothèse est formulée et étayée dans le chapitre 2 pour préciser un lien éventuel entre la proximité des séquences du CYP73A32 et du CYP73A10 avec d'autre part la synthèse de furocoumarines. Malgré une séquence de CYP73 très classique, quelques résidus du CYP73A32 semblent s'écarter du consensus pour quelques acides aminés identifiés comme importants pour la conformation des P450s, en particulier au niveau du coude riche en proline du coté Nterminal et au niveau du méandre en amont du site de fixation de l'hème. L'alignement de la séquence peptidique du CYP73A32 a été réalisé avec des séquences de représentants de C4H de type I et II. De nombreux résidus CYP73A32 qui sont anormaux vis vis des C4H de type I, correspondent des zones pour lesquelles plusieurs séquences des C4H de type II et des C4H de graminées, diffèrent des C4Hs de type I de dicotylédones. On peut retrouver ce phénomène pour plusieurs résidus tout le long de la séquence, avec un agrégat notable de résidus anormaux au niveau du coude proline F38, G39 et F40 du 73A32 ; et du méandre Q416 et V417 du 73A32 ; . L'isoleucine 438 précédant le motif PFG pourrait aussi avoir une importance, ainsi que le résidu F491 a l'extrémité C-terminale. Il est remarquable que les mêmes remarques sont valables également bien que pour un nombre moins important de résidus pour le CYP73A10 du persil. D'après l'analyse de leur séquence peptidique, le CYP73A32 et dans une moindre mesure, le CYP73A10 présentent donc quelques points communs avec certaines C4Hs de graminées et certaines C4Hs de type II, tout en restant des C4H de type I. D'un point de vue phylogénétique, les séquences peptidiques du CYP73A32 et celles des C4H de graminées sont globalement assez éloignées fig.C-18 ; , ce qui accentue la curiosité des groupes de résidus anormaux partagés par ces séquences, au niveau du coude proline, du méandre et de l'extrémité N-terminale. Les plantes de la famille des graminées Poaceae ; , ne synthétisent pas de furocoumarines, et nous n'avons aucune hypothèse pour expliquer ce phénomène. Le sous-groupe des C4Hs de type II se caractérise avant tout par des différences dans la séquence peptidique, mais les caractéristiques biochimiques des enzymes vis vis du substrat semblent identiques celles obtenues pour des C4H de type I Nedelkina et al., 1999 ; . La question de la fonction respective de ces isoformes est l'heure actuelle très 128 et acheter glibenclamide en ligne et fexofenadine.
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